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1章：胶原蛋白的提取与精制1

1.1 胶原的性状及提取过程中的注意事项1

1.1.1 可溶性胶原和不溶性胶原1

1.1.2 有关胶原的术语3

1.1.3 胶原溶液的性质3

1.1.4 沉淀溶液内胶原时的注意事项5

1.1.5 胶原溶液制备过程中的注意事项6

1.1.6 精制胶原的保存8

1.1.7 制备胶原用原材料的前处理8

1.1.8 试剂及器具8

1.2 前胶原的制备9

1.2.1 概述9

1.2.2 实验方法11

1.3 硬组织中胶原的制备方法20

1.3.1 概述20

1.3.2 实验方法23

1.3.3 注意事项和存在的问题28

1.4 各型胶原的制备30

1.4.1 Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型胶原30

1.4.2 Ⅳ型、Ⅴ型、Ⅵ型胶原39

1.4.3 Ⅶ型(LC:Long Chain)胶原47

2章：胶原的分析50

2.1 羟脯氨酸的定量50

2.1.1 概述50

2.1.2 Woessner的方法(第Ⅰ法)51

2.1.3 Kivirikko,Laitinen.Prockop等人的方法52

2.1.4 Inayama.Shibata,Ohtsuki Saito的方法53

2.1.5 应用氨基酸分析仪的定量测定54

2.2 离子交换及层析方法55

2.2.1 概述55

2.2.2 实验方法56

2.3 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)62

2.3.1 概述62

2.3.2 一维SDS-PAGE64

2.3.3 二维电泳76

2.4 荧光自显影86

2.4.1 概述86

2.4.2 荧光自显影的原理86

2.4.3 荧光自显影的实际操作88

2.4.4 光密度检测的定量方法92

2.4.5 荧光自显影时诸条件的探讨93

2.4.6 PPO的回收99

2.5 CB肽段的制备与分离101

2.5.1 CB肽段的制备101

2.5.2 CB肽段的分离104

2.6 羟赖氨酸—糖化合物的分析106

2.6.1 概述106

2.6.2 实验方法108

2.7 架桥的分析118

2.7.1 还原性架桥的分析方法118

2.7.2 非还原性架桥的分析方法132

3章：免疫学的实验方法142

3.1 抗胶原抗体的制备方法142

3.1.1 概述142

3.1.2 实验方法142

3.2 抗体的检测方法150

3.2.1 概述150

3.2.2 实验方法151

3.3 免疫组织化学的检测方法164

3.3.1 概述164

3.3.2 实验方法165

3.4 免疫电镜的方法180

3.4.1 概述180

3.4.2 实验方法180

3.5 迟发型过敏反应188

3.5.1 概述188

3.5.2 皮内试验188

3.5.3 体外判断法:细胞移动抑制试验194

4章: 胶原代谢的研究方法199

4.1 应用细胞培养的胶原合成实验199

4.1.1 组织(器官)细胞的分离200

4.1.2 生物合成实验时培养系统的选择201

4.1.3 放射性羟脯氨酸的定量208

4.1.4 用细菌性胶原酶检测胶原合成率的方法212

4.2 脯氨酸羟化酶、赖氨酸羟化酶219

4.2.1 概述219

4.2.2 脯氨酸羟化酶的测定方法221

4.2.3 脯氨酸3-羟化酶活性的测定方法228

4.2.4 赖氨酸羟化酶活性的测定方法229

4.3 前胶原肽酶活性的测定230

4.3.1 概述230

4.3.2 实验方法231

4.4 赖氨酰氧化酶242

4.4.1 概述242

4.4.2 实验方法242

4.4.3 注意和存在的问题247

4.5 胶原酶及有关胶原分解酶活性的测定方法248

4.5.1 间质型胶原分解酶活性的检测方法250

4.5.2 膜型(Ⅳ型及Ⅴ型)胶原分解酶活性的检测方法263

4.5.3 明胶分解酶活性的测定方法264

4.5.4 酶的活化266