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第一章　骨和软骨的正常组织学1

第一节 软骨1

一、软骨组织1

二、软骨组织的分类2

三、软骨的组织发生2

四、软骨的退变3

五、软骨的再生和移植3

第二节 骨3

一、骨组织的构成3

二、骨的组织结构5

三、骨的发生7

四、骨的后续生长8

第三节　关节9

一、关节软骨9

二、关节囊9

三、滑液9

第二章　骨组织病理解剖实验室设备及试剂10

第一节 骨组织病理解剖实验室的布置与要求10

一、骨组织病理解剖实验室的布置10

二、骨组织病理解剖实验室的设计要求11

第二节 骨组织病理解剖实验室基本设备及常用试剂18

一、仪器设备18

二、储存陈列设备19

三、实验用设备及试剂20

第三章　骨组织的脱钙技术21

第一节 骨组织脱钙技术概述21

一、骨组织脱钙方法21

二、骨组织脱钙技术的应用22

三、骨组织脱钙技术程序22

第二节 常规骨组织的病理脱钙技术22

一、酸类单纯脱钙技术23

二、酸类混合脱钙技术24

第三节 骨组织科研制片的脱钙技术28

一、螯合剂（EDTA）法28

二、缓冲脱钙液法28

三、甲酸-螯合剂脱钙法29

四、电镜脱钙技术29

第四节 脱钙“终点”的测定30

一、物理检测法30

二、X线检测法30

三、化学检测法30

第五节 脱钙后处理30

一、碱处理31

二、乙醇处理31

三、流水冲洗31

第六节 实用性指南31

一、脱钙方法的选择标准31

二、脱钙方法的选择原则32

三、缓冲脱钙技术32

四、JYBL-Ⅱ脱钙技术32

五、JYBL-Ⅲ50％甲酸脱钙技术32

第七节 骨脱钙应注意的问题33

一、取材厚度33

二、脱钙液量33

三、脱钙温度33

四、脱钙时间33

五、使用器皿33

六、固定要求33

七、脱脂处理33

第四章 骨组织病理标本常规制片技术35

第一节 骨组织的固定技术35

一、骨组织的固定35

二、常用于骨组织的固定剂35

三、实用性指南36

第二节 骨组织的脱水技术36

一、骨组织的脱水36

二、骨组织的脱水方法36

三、实用性指南38

第三节 骨组织的透明技术38

一、骨组织的透明38

二、透明剂的使用38

三、使用方法38

四、实用性指南38

第四节 骨组织的浸蜡及包埋技术39

一、石蜡浸蜡包埋技术40

二、实用性指南40

第五节 骨组织标本的切片技术40

一、切片刀41

二、切片刀的研磨44

三、切片机46

四、骨组织常规切片法46

第六节 骨穿刺标本的脱钙制片技术46

一、骨穿刺标本制片技术的认知47

二、骨穿刺标本的制片方法47

第五章　骨组织标本的常规染色技术49

第一节 苏木素染色的原理及常用苏木素染色液的配制49

一、苏木素染料简介49

二、染色原理50

三、苏木素的氧化50

四、媒染剂50

五、苏木素染液的配制51

第二节 伊红染色的原理及常用伊红染色液的配制52

一、伊红染料简介52

二、染色原理53

三、伊红染料的促染53

四、伊红染液的配制53

第三节 苏木素-伊红染色的分化及返蓝54

一、分化的目的54

二、分化的原理54

三、分化的控制54

四、返蓝的目的54

五、分化液及返蓝液的配制55

第四节 苏木素-伊红染色的程序及注意事项55

一、手工染色程序55

二、全自动染色机染色程序56

第六章　骨的组织学特殊染色技术58

第一节 软骨组织的特殊染色技术58

一、透明软骨结构的显示58

二、弹性软骨结构的显示64

三、纤维软骨结构的显示67

第二节 骨的组织学特殊染色技术69

一、未脱钙骨组织的染色技术69

二、脱钙骨组织的染色技术72

第七章　骨组织病理学的特殊染色技术77

第一节 糖原染色技术77

一、Best胭脂红法77

二、Gomori银染法（Arzac与Flores改良法）78

三、铬酸-雪夫反应（CAS）79

第二节 黏液染色技术80

一、异染反应80

二、阿新蓝染色技术82

三、Hale胶性铁技术85

四、Gomori醛品红染色法86

第三节 结缔组织染色技术87

一、胶原纤维染色技术87

二、网织纤维染色技术88

三、弹力纤维染色技术91

第四节 肌肉组织染色技术93

一、磷钨酸-苏木素染色法PTAH93

二、Puchtler法94

第五节 脂类染色技术95

一、苏丹Ⅲ染色法95

二、油红O染色法96

三、尼罗蓝染色法97

第六节 色素的显示技术97

一、含铁血黄素的显示技术97

二、黑色素的显示方法99

第七节 抗酸杆菌染色技术100

一、Ziehl-Neelsen法100

二、Wade-Fite抗酸新染法101

第八节 痛风结晶的显示技术102

一、Mallory显示尿酸盐结晶法102

二、Gomori-Burtner六胺银法102

第九节 骨髓标本的染色技术103

一、骨髓穿刺液标本的石蜡制片染色技术103

二、大体标本骨髓取材制片染色技术（骨肿瘤断端骨髓取材标本）104

第十节 淀粉样物质的显示技术105

一、刚果红染色技术（Benhold）105

二、Lendrum染色技术105

三、Wolman甲苯胺蓝技术106

第八章　骨及软骨的酶组织化学技术107

第一节 酶的保存107

第二节 酶的显示技术107

一、碱性磷酸酶（AKP）的显示107

二、酸性磷酸酶（ACP）的显示109

三、琥珀酸脱氢酶（SDH）的显示110

四、三磷酸腺苷酶（ATP）的显示111

第九章 骨组织病理制片染色常见问题及处理方法114

第一节 骨组织制片中易出现的问题及处理方法114

第二节 骨组织切片染色中易出现的问题及处理方法115

第三节 骨肿瘤标本冷冻切片易出现的问题及处理方法116

第四节 实用性指南116

第十章　骨病理染色技术在诊断中的应用118

第一节 染色技术在骨疾患特殊结构和物质显示上的应用118

一、糖原、黏液物质的显示118

二、网织纤维染色的应用119

三、含铁血黄素染色的应用120

四、其他病理性产物的显示120

第二节 染色技术在骨疾患鉴别诊断中的应用120

一、网织纤维染色的应用120

二、糖原、黏液染色的应用121

三、脂肪染色的应用121

四、其他染色的应用122

第十一章　骨的细胞学技术124

第一节 骨病理细胞学制片技术124

一、涂片技术124

二、印片技术125

三、骨肿瘤细胞学滤片制作技术125

四、骨肿瘤穿刺针吸细胞学技术126

五、骨组织细胞学的固定技术127

第二节 骨细胞学的染色技术128

一、Wright法128

二、Leishman染色法129

三、Giemsa快速染色法130

第三节 常见骨肿瘤细胞学形态130

一、骨的原发性恶性肿瘤130

二、杂类的骨肿瘤细胞132

第十二章　骨组织的免疫组织化学技术133

第一节 抗体133

一、免疫球蛋白133

二、多克隆抗体134

三、单克隆抗体134

四、抗体的选择134

五、抗体的亲和力134

六、抗体的交叉反应135

七、抗体的反应率135

八、抗体的稳定性135

九、抗体的处理135

十、抗体滴度136

十一、抗体稀释136

十二、抗体孵育136

第二节　基础酶学137

一、过氧化物酶137

二、底物和色原137

三、底物-色原试剂的使用方法137

第三节 细胞组织的固定138

一、涂片的固定138

二、冷冻切片的固定138

三、石蜡切片的固定138

四、推荐固定液138

第四节 抗原修复138

一、原理和技术138

二、作用机制139

三、石蜡切片抗原热修复方法139

第五节 染色方法140

一、染色原理140

二、染色方法142

三、常用试剂的配制144

四、实用性指南146

第六节 免疫组化的自动化技术153

第七节 骨肿瘤免疫组化的联合表达154

一、骨肿瘤的分类154

二、骨肿瘤的抗体156

三、免疫组化抗体在骨肿瘤中的表达156

第十三章 骨组织病理特殊制片技术168

第一节 骨磨片技术168

一、空气封闭法显示骨陷窝及骨小管168

二、染色法显示骨小管168

第二节 骨组织火棉胶大切片技术170

一、火棉胶浸渍包埋技术170

二、火棉胶制片技术171

三、骨组织火棉胶大切片的染色技术172

第三节 不脱钙骨组织的塑料包埋制片技术173

一、双重包埋不脱钙骨组织切片技术174

二、树脂包埋不脱钙骨组织切片技术174

三、塑料包埋不脱钙骨组织切片技术175

四、塑料包埋不脱钙骨组织玻璃刀制片技术177

第四节 石蜡包埋制作股骨头大型切片技术178

一、甲酸脱钙制作股骨头整体切片技术178

二、微波螯合剂脱钙制作股骨头大切片技术179

第五节 EXAKT骨组织切磨片技术180

一、EXAKT硬组织切片机181

二、EXAKT硬组织磨片机182

三、EXAKT平行载片粘合压片机183

四、EXAKT脱水渗透机184

五、EXAKT光固化包埋机184

六、EXAKT干燥渗透再聚合装置185

七、操作程序186

第六节 牙体组织制片技术189

一、牙体组织的切片法189

二、牙体组织的磨片法192

三、锯割式切片机在口腔硬组织病理的制片技术192

第十四章　骨组织的电子显微镜技术194

第一节 电子显微镜技术概述194

一、成像原理194

二、基本要求195

三、样品制备的方法195

四、冷冻置换法196

五、电镜放射自显影技术196

第二节 骨组织电子显微镜技术198

一、骨组织的取材固定198

二、骨组织的脱钙198

三、骨组织的脱水198

四、骨组织的包埋198

五、骨组织的超薄切片199

六、骨组织的染色（醋酸双氧铀-枸橼酸铅双重染色法）199

七、观察199

八、实用性指南199

第三节 骨组织的电镜酶组织化学技术200

一、酸性磷酸酶技术200

二、碱性磷酸酶技术201

第四节 电镜在骨肿瘤诊断和研究中的应用203

一、电镜在认识骨肿瘤成分及性质中的作用203

二、电镜在探讨骨肿瘤组织来源中的作用203

三、电镜对判断骨肿瘤良恶性的作用203

四、电镜对探讨骨肿瘤某些基础理论的作用204

第五节 几种常见骨肿瘤的电镜观察结果204

一、骨肉瘤204

二、骨巨细胞瘤204

三、骨原发性恶性纤维组织细胞瘤205

四、骨的纤维肉瘤205

五、骨髓瘤205

六、骨软骨瘤205

七、成软骨细胞瘤205

八、软骨肉瘤206

九、Ewing肉瘤206

十、釉质瘤206

第十五章　骨组织PCR技术207

第一节 PCR基因扩增原理207

第二节 PCR技术的基本设备207

一、PCR扩增仪207

二、移液器208

三、试剂的配制、分装和保存208

第三节 用石蜡切片制作PCR样本的方法208

一、骨组织PCR石蜡切片标本的制备208

二、二甲苯脱蜡提取法209

三、水浴脱蜡提取法209

四、提取DNA扩增法210

五、提取DNA应注意的问题210

第四节 原位PCR技术210

一、标本制备211

二、预处理211

三、原位扩增211

四、原位杂交211

第五节 运用PCR技术对人骨组织和牙齿进行性别鉴定技术211

一、骨组织和牙齿的处理211

二、生化试剂212

三、DNA提取212

第六节 实用性指南212

一、骨PCR扩增技术中应注意的问题212

二、骨组织PCR方法的选择应用问题214

第十六章　骨组织原位杂交技术215

第一节 原位杂交技术的原理215

一、原位杂交215

二、探针的种类215

三、核酸分子杂交216

第二节 原位杂交技术所需器材及试剂216

一、主要器材216

二、试剂216

第三节 骨组织原位杂交218

一、杂交前组织处理218

二、预杂交218

三、杂交218

四、显色218

第四节　不脱钙骨组织原位杂交技术219

一、标本制备219

二、原位杂交220

三、注意事项220

四、试剂配制220

第五节　FISH和PRINS技术221

一、荧光原位杂交（FISH）221

二、用引物介导的原位标记（PRINS）222

第六节 实用性指南223

一、探针的选择223

二、探针的标记223

三、探针的浓度223

四、杂交223

五、杂交最适温度223

六、杂交的严格性224

七、杂交反应时间224

八、杂交促进剂224

第十七章　骨组织的动物实验技术226

第一节　基本要求226

一、实验动物背景资料记录226

二、试验动物体表检查226

三、试验动物标本取材的基本要求227

第二节 实验动物病理剖检基本操作228

一、常用器械及使用方法228

二、基本操作228

第三节 实验动物病理形态学观察实验程序229

一、实验动物骨组织脱钙法制片程序229

二、实验动物骨组织不脱钙法制片程序230

第四节 实验动物绿色荧光蛋白骨的冷冻切片法231

一、操作程序231

二、实用性指南231

第五节 实验动物骨组织金属种植体的制片方法232

一、操作程序232

二、实用性指南232

第十八章　骨组织病理实验技术234

第一节 乙醇穿入皮质骨速率的实验技术234

一、实验（Ⅰ）235

二、实验（Ⅱ）235

三、实验的统计学意义236

第二节 骨细胞和软骨细胞的组织化学实验技术237

一、实验（Ⅰ）骨细胞与软骨细胞的SDH显示237

二、实验（Ⅱ）SDH活性与形态学的关系238

第三节 骨肿瘤病理中抗人Ⅰ、Ⅱ型胶原抗体实验技术240

一、材料和方法240

二、抗人Ⅰ、Ⅱ型胶原抗体在骨肿瘤病理研究中的应用241

第四节 骨基质诱导异位骨形成实验模型的组织学和组织化学实验技术242

一、材料和方法243

二、诱导性骨形成的组织化学定位243

三、实验结果244

第五节 未脱钙骨的酶组织化学实验技术——骨折模型低温塑料切片245

一、实验材料245

二、固定脱脂脱水245

三、浸透245

四、包埋245

五、切片245

六、染色245

第六节 免疫组化在骨小圆细胞性成骨肉瘤诊断及鉴别诊断中的价值246

一、概要246

二、目的247

三、材料和方法247

四、观察结果247

五、讨论247

第七节 实验家兔骨折愈合的骨组织形态计量学实验技术248

一、材料和方法248

二、骨折模型不脱钙切片的制作250

三、骨计量学测量方法及测定指标252

四、骨组织形态测量学参数252

五、实验结果253

六、骨计量测量指标、公式及单位255

第十九章　微波（MW）在骨组织病理制片技术中的应用257

第一节　基本原理257

第二节 骨组织的MW固定脱钙法257

一、操作方法258

二、实用性指南258

第三节 骨组织MW脱水、透明、浸渍法258

第四节 骨组织MW特殊染色法258

第五节 软骨组织冷冻切片MW处理法259

第六节 骨组织免疫组化的MW法259

一、操作方法259

二、作用机制259

三、MW辐射功率及时间260

四、实验稳定性和安全性260

五、MW免疫组化的特点261

六、电镜MW法261

七、原位杂交MW法261

八、原位PCR的MW法261

第二十章　骨组织绿色环保型病理制片技术263

第一节　材料和方法264

一、材料264

二、方法264

第二节 应用265

一、FmeFIX环保型固定剂的应用265

二、WaxOut、WaxIn无毒型组织脱蜡、透明剂的应用265

三、C.D脱蜡剂的应用267

四、UltraKitt的应用268

第二十一章　骨的组织芯片技术270

第一节 骨组织芯片制备程序270

一、材料及设备270

二、骨组织处理程序271

第二节 组织芯片制作程序271

一、采用包埋框制备空白蜡块坯271

二、挖取组织272

三、填埋组织272

四、重复上述操作272

五、整形272

六、二次包埋272

七、切片272

第三节 实用性指南273

一、制作阵列孔毛坯时蜡块碎裂273

二、阵列孔的毛坯从管刀上退不下来或蜡块严重变形273

三、从供体蜡块上挖去的目标组织不能全部去除273

四、切片容易掉片273

五、真空泵过滤器内有蜡液或管道中有蜡液，蜡凝固后将管道封死274

第四节 组织芯片的应用274

第五节 组织芯片的优缺点274

一、优点274

二、局限性274

第二十二章　骨骼标本的陈列技术276

第一节 人体骨骼分类及名称276

一、骨的分类276

二、骨的表面形态276

三、中轴骨骼279

四、附肢骨骼291

第二节 骨骼标本材料的收集299

一、骨骼标本的获得途径299

二、标本收集时要注意的问题299

第三节 骨骼标本材料的处理299

一、经防腐固定后的骨骼标本处理300

二、腐胔骨的处理300

三、未经防腐固定处理的标本处理300

第四节 骨骼标本的制作技术301

一、脱脂302

二、漂白302

三、表面处理303

四、骨骼标本的连接303

五、骨骼标本的装配固定305

六、整体骨架的串联305

七、活动骨标本的串联技术309

八、可移动手骨标本的串联技术310

九、可移动足骨标本的串联技术311

十、带有韧带和关节囊的可移动骨骼标本的串联技术311

第五节 骨标本的加工技术311

一、颅骨的分离311

二、骨的锯切312

第六节 人体骨骼标本制作的改进方法313

一、取材313

二、制作方法313

第七节 骨透明标本的制作314

一、胚胎骨骼透明标本的制作技术315

二、胚胎骨骼染色透明标本的制作技术315

三、胚胎骨与软骨双重染色透明标本制作技术316

四、骨空腔性内部结构的透明标本制作技术317

五、骨血管透明标本制作技术318

第八节 显示骨结构和成分的标本制作技术318

一、骨膜的显示318

二、骨质的显示319

三、骨髓的显示319

四、骨化学成分的显示319

第二十三章 实验动物骨骼标本的制作技术320

第一节 骨骼染色透明标本的制作技术（方法Ⅰ）320

一、材料、药品320

二、制作步骤321

三、实用性指南321

四、结果评估321

第二节 骨骼染色透明标本的制作技术（方法Ⅱ）321

一、材料与方法321

二、结果评估322

三、实用性指南322

第二十四章　骨肿瘤标本的制作技术323

第一节 骨肿瘤标本的组织固定技术323

第二节 骨肿瘤标本的剖面技术324

一、检视和构思324

二、具体操作324

第三节 骨肿瘤标本的放置和固定技术326

一、基本方法和原则326

二、具体操作326

第四节 保存液的配制328

一、常用保存液的配制329

二、自然保色液的配制329

第五节 封缸与标签329

一、封缸胶的配制330

二、封缸操作法330

三、标签330

第六节 骨骼浸渍标本的制作技术330

第七节 骨肿瘤薄片解剖标本的制作技术331

一、制作方法和处理331

二、显色和染色332

三、薄片标本的HE染色法332

四、有机玻璃盒的制作332

五、冲水槽的制作333

六、冲水框的制作333

第二十五章　骨组织病理资料管理334

第一节 骨组织病理资料管理的要求与设备334

一、要求334

二、设备335

第二节 骨组织病理资料管理的方法及功能335

一、方法336

二、病理资料管理系统的内容336

三、骨病理资料管理系统的功能336

四、骨病理资料研究系统的功能337

第三节 微机骨病理资料管理系统的实用性指南337

一、微机管理系统给我们带来的好处337

二、骨病理资料计算机网络化管理的必要性337

三、存在问题及对策338

第二十六章　常用配方及计算方法340

第一节　缓冲液340

一、Ⅰ型缓冲液（弱酸及其盐）340

二、Ⅱ型缓冲液（强碱-弱酸及其盐）341

三、Ⅲ型缓冲液（强酸-弱酸及其盐）342

四、Ⅳ型缓冲液（同一种酸的两种盐）344

五、其他缓冲液的配制345

六、实用性指南349

七、常用于缓冲液的化学试剂的分子量349

第二节 常用酸碱盐溶液的简便配制法350

一、常用酸溶液的配制法350

二、常用碱溶液配制法350

三、常用盐溶液配制法351

四、pH与溶液酸碱度的关系351

五、Hp与酸碱度变化的关系351

第三节 化学计算及试剂特性352

一、计算公式352

二、各种固定剂穿透组织的速率计算表353

三、常用骨组织染料的溶解度353

第四节 免疫组织化学常用试剂配制方法354

一、固定液354

二、缓冲液355

三、显色液355

第五节 原位杂交技术试剂的配制356

一、原液356

二、工作液357

第六节 关于化学试剂配制的其他有关问题357

一、关于媒染剂357

二、关于染料的溶解度358

三、关于荧光染料359

四、关于溶液的稀释360

五、关于清洁液361

六、常用计量单位361

七、关于单位的名称及符号361

参考文献364

附录（一）　骨科手术植骨用骨的制备技术367

第一节 骨库的相关标准367

一、术语定义368

二、骨库的建立和生产同种骨的有关条例368

三、供体选择标准369

第二节 冷冻干燥和低温冷冻法骨库的建立370

一、骨库设备370

二、供体来源371

第三节 骨材料贮存的制作方法372

一、低温冷冻法372

二、冷冻干燥法373

三、骨产品的灭菌373

四、记录保存和产品应用374

五、异体骨移植材料的制作流程375

六、异种骨植骨材料的制作流程375

七、人工骨骨移植材料376

第四节 骨移植376

一、自体骨移植377

二、异体骨移植377

三、异种骨移植377

四、骨移植的生物学和评定方法378

附录（二）　其他特殊组织的制片方法380

第一节 皮肤组织的制片方法380

一、经典方法380

二、改良方法382

三、实用性指南382

第二节 脂肪组织的制片方法382

一、经典方法383

二、改良方法383

三、实用性指南384

第三节 淋巴组织的制片方法384

一、经典方法384

二、改良方法385

三、实用性指南386

第四节 肌腱组织的制片方法386

第五节 肾穿组织的制片方法387

一、经典方法387

二、改良方法388

三、实用性指南388

第六节 神经组织的制片方法390

一、中枢神经系统的制片方法390

二、末梢神经组织的制片方法391

第七节 钙化组织的制片方法393

一、经典方法393

二、改良方法393

三、实用性指南394

第八节 烧伤皮肤的制片方法394

第九节 肌肉组织的制片方法395

第十节 指甲的制片方法396

第十一节 眼球的制片方法397

第十二节 需软化处理的组织制片方法397

第十三节 易碎裂组织的制片方法398

第十四节 石蜡包埋组织块快速补救脱钙制片法398

附录（三）　常用名词术语英汉对照表399

第一节 骨病理技术常用名词术语英汉对照表399

第二节 化学试剂常用名词术语英汉对照表404

附录（四）　关子FineFIX固定剂的应用412

一、总则412

二、采用FineFIX固定大体标本413

三、组织类别与固定方法413

四、采用FineFIX固定液制作病理切片421

五、FineFIX环保处理422

六、FineFIX固定剂在免疫组化中的应用422

七、FineFIX固定剂的优点423

八、FineFIX固定后组织切片显微镜下的形态表现423

九、FineFIX在取材室中的优势423

十、FineFIX固定剂值得推荐423

附录（五） 骨组织病理解剖学技术图片展示425