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第一章 玉米种子质量鉴定技术的发展1

第一节 玉米种子质量及种子质量检测的重要性1

第二节 主要的种子鉴定技术3

一、常规鉴定技术3

二、现代鉴定技术4

第三节 分子技术在玉米品种鉴定中的发展趋势11

一、从RAPD标记到SSR标记的技术提升11

二、从SSR标记到SNP标记的技术探索11

三、从非功能标记向功能标记的转变12

第二章 玉米品种DNA指纹鉴定标准试验体系的建立17

第一节 DNA提取方法的研究17

一、DNA提取的基本方法及原理17

二、DNA快速提取方法研究——碱煮法24

三、高质量DNA提取方法研究——改良高盐低pH法26

四、果皮组织DNA提取方法研究28

第二节 PCR扩增反应程序和反应体系的研究30

一、通用PCR扩增反应程序的建立30

二、多重PCR扩增体系的建立33

第三节 电泳检测方法的研究37

一、主要电泳检测方法的比较37

二、PAGE／快速银染检测法的研究38

三、毛细管电泳多色荧光检测与变性PAGE电泳银染检测两种检测方法的比较41

四、毛细管电泳荧光检测中的异常电泳类型及原因分析44

第三章 核心引物的筛选确定及多重电泳系统的建立49

第一节 玉米DNA指纹鉴定中核心引物组合法的确立49

一、特征谱带法、引物组合法和核心引物组合法的概念49

二、特征谱带法、引物组合法和核心引物组合法的比较研究49

第二节 玉米通用SSR核心引物筛选51

一、研究目的51

二、研究思路51

三、100个核心引物筛选的详细步骤53

四、核心引物的重新设计58

五、荧光多重PCR组合的建立62

第三节建库核心引物的确定及多重电泳系统的建立64

第四章 玉米DNA指纹库数据统计及建库标准化规范72

第一节 DNA指纹库数据的统计72

一、建库SSR引物基本信息72

二、原始数据统计记录方式73

三、原始数据导入数据库的方式73

第二节玉米DNA指纹数据库建库标准化规范的建立74

一、标记方法及标记来源74

二、检测平台74

三、试剂质量保证75

四、样品的来源及性质75

五、引物及流程的评估75

六、不同来源数据的有效整合76

七、构建品种DNA指纹模式库77

八、构建品种DNA指纹扩展库78

九、数据库数据的随机盲测78

第五章玉米DNA指纹数据库管理系统的建立79

第一节数据信息表的整理79

一、信息类资料79

二、数据类资料81

三、图片类资料82

第二节分析功能的设计及实现82

一、主要功能及定义82

二、品种查询比较功能的设计83

三、亲子鉴定功能的设计84

四、品种指纹图谱绘制功能的设计85

五、一致性鉴定功能的设计86

六、纯度鉴定功能的设计87

第三节网站用户权限分类及设计87

第四节未来发展战略规划88

一、建立玉米DNA指纹国际联合数据库及管理系统88

二、建立DNA指纹数据库、分子标记辅助育种、单倍体育种技术三位一体的高效玉米育种技术体系89

第六章 DNA指纹技术在玉米品种真实性、纯度、一致性、特异性鉴定中的应用研究90

第一节 DNA指纹技术在玉米品种真实性鉴定中应用的方式和策略90

一、涉及品种真实性鉴定的几个重要概念90

二、真实性鉴定的类别91

第二节 DNA指纹技术在玉米品种纯度鉴定中的应用研究94

一、玉米杂交种纯度鉴定核心引物的选择标准94

二、特定品种纯度鉴定特异引物选择标准96

三、双亲互补带型——适于玉米杂交种纯度鉴定的谱带类型98

四、玉米杂交种纯度鉴定具体工作流程99

五、4种混杂类型谱带分析举例100

第三节 DNA指纹技术在玉米品种一致性鉴定中的应用研究104

一、一致性检测中异型带的类型104

二、不同品种、不同位点一致性分布特征105

三、一致性检测标准的制定108

四、造成品种一致性差的原因分析110

第四节 DNA指纹技术在玉米品种特异性鉴定中的应用研究110

一、现行的形态DUS测试系统面临的问题110

二、分子技术在玉米特异性测试中的应用策略111

三、分子测试标准的制定113

四、需探讨的几个问题114

第七章 DNA指纹技术在玉米品种鉴定中的应用115

第一节我国玉米品种推广情况及对品种管理工作的启示115

一、不同省份玉米种植面积概况115

二、不同省份玉米品种推广概况116

三、不同玉米品种推广趋势119

四、玉米品种推广情况反映出来的重要信息121

第二节 DNA指纹技术在玉米品种区域试验中的应用122

一、我国玉米区域试验品种DNA指纹检测工作历程123

二、玉米区域试验品种DNA指纹检测工作特点123

三、DNA指纹监控工作值得思考的几个问题127

四、玉米区试DNA指纹检测工作的意义129

五、关于加强品种市场管理的对策建议129

第三节 DNA指纹技术在玉米自交系鉴定中的应用研究131

一、DH系群体材料的创制131

二、DH系群体材料的鉴定评价132

三、DH系的表现132

四、DNA指纹技术在鉴定DH系材料纯合程度上的价值134

第八章 玉米品种实验室鉴定技术具体操作程序136

第一节 玉米SSR标记鉴定技术136

一、DNA提取136

二、PCR扩增144

三、电泳检测146

四、数据统计记录155

五、结果判定156

第二节 玉米种子清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定技术156

一、实验目的156

二、仪器设备与试剂156

三、溶液配制156

四、电泳操作技术157

第三节 玉米种子酯酶同工酶等电聚焦电泳158

一、实验目的158

二、仪器设备与试剂158

三、溶液配制158

四、电泳操作技术159

附录 法规文件汇编汇总166

玉米品种真实性DNA鉴定技术规范166

国家玉米品种试验DNA指纹鉴定管理办法182

国家区试玉米品种一致性及真实性DNA指纹检测技术184

农作物种子质量监督抽查管理办法191

最高人民法院关于审理侵犯植物新品种权纠纷案件具体应用法律问题的若干规定196

农业植物新品种权侵权案件处理规定198

北京市高级人民法院关于印发《北京市高级人民法院关于知识产权司法鉴定若干问题的规定（试行）》的通知201

农作物种子质量纠纷田间现场鉴定办法205

北京市种子管理站行政处罚条例208

DNA指纹图谱测试指南：分子标记选择和数据库构建（概要）214

中华人民共和国种子法217

农业转基因生物安全管理条例226

中华人民共和国植物新品种保护条例实施细则（农业部分）233

主要农作物品种审定办法242

农业部现行规章清理结果246

农业植物品种命名规定247

主要参考文献249