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第一编 概论1

第一章 生命大分子物质的制备1

第一节 材料的选择与处理2

一、材料的选择2

二、材料的处理2

第二节 确立测定方法4

一、目的与要求4

二、常用的测定方法5

第三节 细胞的破碎6

一、机械破碎6

二、溶胀和自溶7

三、化学处理8

四、生物酶降解8

第四节 抽提9

一、抽提的含义9

二、抽提有效成分的影响因子9

第五节 浓缩14

一、沉淀法14

二、吸附法14

三、超过滤法14

四、透析浓缩法14

五、减压蒸馏浓缩法15

六、冰冻干燥法15

第六节 纯化方案的设计与评价16

一、纯化方案的设计17

二、纯化方案的评价17

第七节 有效成分纯度和性质的分析20

第八节 实例21

一、制备高纯度人转铁蛋白的快速方法21

二、叶绿体的提取与4.5SRNA的制备21

三、细菌质粒DNA的提取22

思考题22

第二编 纯化方法24

第二章 沉淀法24

第一节 基本原理24

第二节 沉淀的类型与操作25

一、盐析法25

二、有机溶剂沉淀法33

三、蛋白质沉淀剂35

四、聚乙二醇沉淀作用36

五、选择性沉淀法36

六、结晶37

第三节 实例38

思考题39

第三章 吸附层析40

第一节 吸附柱层析42

一、常用术语42

二、基本原理44

三、吸附剂44

四、洗脱剂48

五、层析柱的制备与层析操作49

六、应用与实例52

第二节 薄层层析55

一、操作及注意事项57

二、实例63

第三节 聚酰胺薄膜层析68

一、基本原理69

二、应用70

思考题76

第四章 离子交换层析78

第一节 基本原理78

第二节 离子交换剂的分类及性质81

一、分类82

二、性质86

第三节 离子交换剂与缓冲液的选择96

一、离子交换剂的选择96

二、缓冲液的选择99

第四节 操作99

一、离子交换剂的处理、再生和转型99

二、分离物质的交换101

三、物质的洗脱与收集102

第五节 应用105

一、制备、纯化生命物质105

二、测定蛋白质的等电点110

思考题111

第五章 凝胶过滤113

第一节 凝胶的分类及性质113

一、葡聚糖凝胶113

二、琼脂糖凝胶117

三、聚丙烯酰胺凝胶121

四、Sephacryl122

第二节 基本原理123

第三节 操作127

一、凝胶的选择和处理127

二、凝胶柱的制备129

三、加样与洗脱130

四、凝胶柱的再生及保存135

第四节 应用138

一、脱盐和浓缩138

二、分离生命物质138

三、去热源物质139

四、测定分子量140

五、其它145

思考题146

第六章 亲和层析147

第一节 基本原理148

第二节 操作151

一、基质的选择151

二、配体的选择152

三、亲和吸附剂的制备153

四、特异吸附158

五、分离大分子物质160

六、亲和层析柱的再生162

第三节 提高吸附剂的操作容量162

一、在配体和基质之间引入“手臂”（arms）162

二、增加配体取代的程度164

三、配体与基质以最少的键连接164

四、基质多孔性的影响166

五、其它167

第四节 应用167

一、纯化大分子物质167

二、研究酶的结构与功能172

思考题173

第七章 聚焦层析174

第一节 基本原理174

一、多缓冲剂和多缓冲交换剂174

二、聚焦层析原理176

第二节 操作179

一、多缓冲剂的选择181

二、多缓冲交换剂用量的确定181

三、多缓冲交换剂的处理181

四、样品的准备183

五、上样和洗脱183

六、样品中多缓冲剂的去除184

第三节 应用184

一、分离模型蛋白质185

二、分离复杂的物质186

三、鉴定某些酶的性质188

思考题189

第八章 气相色谱190

第一节 基本原理191

一、常用术语191

二、原理193

第二节 气相色谱仪的构造195

一、气源、载气流速的控制和测量196

二、进样系统197

三、恒温室198

四、色谱柱198

五、检定器204

第三节 操作206

一、操作要点206

二、条件的选择207

第四节 定性和定量分析207

一、定性分析207

二、定量分析209

第五节 应用214

一、分析蛋白质和氨基酸215

二、分析核酸215

三、分析糖类物质217

四、分析脂肪酸217

五、分析农药218

思考题218

第九章 高效液相色谱219

第一节 基本原理219

第二节 应用223

一、定性和定量分析224

二、测定酶活性225

三、测定蛋白质分子量226

四、分离液酸和蛋白质228

五、附表：部分色谱柱的性能及有关参数230

思考题235

第十章 固定化酶与微生物236

第一节 制备方法237

一、固定化酶237

二、固定化微生物241

第二节 制品的性质242

一、酶的相对活力242

二、活力曲线与最适pH245

三、稳定性249

四、米氏常数251

五、其它252

第三节 应用253

一、工业方面253

二、医学方面255

三、生化分析方面256

四、应用实例259

思考题262

第三编 鉴定方法264

第十一章 生物传感器264

第一节 基本原理265

一、离子选择电极265

二、生物活性材料267

第二节 类型与制备268

一、类型268

二、制备269

第三节 应用270

一、工业方面270

二、医学方面271

三、环境监测方面272

思考题274

第十二章 电泳275

第一节 基本原理276

第二节 纸电泳279

一、材料准备280

二、点样282

三、电泳284

四、烘干284

五、显色284

六、定量测定284

第三节 聚丙烯酰胺凝胶电泳287

一、基本原理288

二、操作295

第四节 琼脂电泳321

一、基本原理321

二、操作322

三、应用实例324

第五节 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳324

一、基本原理325

二、操作326

第六节 聚丙烯酰胺凝胶电聚焦327

一、基本原理328

二、两性电解质的理化性质329

三、两性电解质的pH范围与用量的选择330

四、测定蛋白质等电点的操作331

第七节 印迹法（转移电泳）335

一、基本原理336

二、操作及注意事项337

三、应用340

思考题342

第十三章 免疫分析344

第一节 抗体的性质、制备及纯化344

一、抗体的性质344

二、多克隆抗体的制备345

三、单克隆抗体的制备353

四、抗体的检测358

五、抗体的纯化362

第二节 抗原抗体反应366

一、标记366

二、分析方法373

思考题385

第十四章 聚合酶链式反应388

第一节 原理388

一、反应物与最适条件389

二、PCR原理391

第二节 操作393

一、试剂的配制393

二、步骤394

第三节 应用396

一、检测基因的分离和表达396

二、检测癌症397

思考题397

附录399

一、常用数据399

二、常用缓冲液的配制414

参考文献423