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第一章 绪论1

一、分子生物学检验技术形成的理论基础1

二、分子生物学检验技术在实验诊断中的应用3

三、分子生物学检验技术的展望4

第二章 原核生物基因组与病毒基因组5

第一节 原核生物基因组5

一、原核生物基因组特征5

二、大肠杆菌基因组特征7

三、细菌基因组学研究及意义8

第二节 质粒10

一、质粒的概念10

二、质粒的类型10

三、质粒的一般性质11

四、转位因子12

第三节 病毒基因组13

一、病毒基因组特征14

二、DNA 病毒15

三、RNA 病毒19

第四节 朊病毒23

一、朊病毒的生物学特性23

二、朊病毒蛋白基因结构24

三、朊病毒的复制过程24

四、朊病毒病25

第三章 真核生物基因组27

第一节 真核生物基因组特点27

一、细胞核基因组与细胞质基因组27

二、单顺反子结构28

三、断裂基因28

四、重复序列29

五、多基因家族与假基因32

六、多态性32

七、基因重叠33

第二节 基因组结构与疾病33

一、人类染色体的结构与疾病33

二、基因结构与疾病36

三、端粒与端粒酶39

第三节 人类基因组与人类基因组计划42

一、人类基因组42

二、人类基因组计划42

第四章 癌基因与抑癌基因46

第一节 癌基因46

一、癌基因及其表达产物的作用46

二、原癌基因的激活机制49

第二节 抑癌基因50

一、抑癌基因及其表达产物50

二、抑癌基因失活机理51

三、肿瘤发生中的基因变化52

第三节 原癌基因与抑癌基因的检测及评价54

一、主要检测技术54

二、原癌基因与抑癌基因的检测55

三、肿瘤相关基因检测的评价55

第五章 蛋白质组与蛋白质组学57

第一节 蛋白质组学研究特点57

第二节 蛋白质组学研究范畴58

一、蛋白质-蛋白质相互作用的研究58

二、蛋白质-核酸间相互作用的研究61

三、蛋白质组及其质点的分离与分析64

第三节 蛋白质数据库及其应用68

一、蛋白质数据库68

二、蛋白数据库的应用70

第四节 蛋白质组研究在医学中的应用70

一、用于疾病诊断的研究70

二、用于发病机制的研究71

三、用于致病菌耐药性的研究72

第六章 核酸的分离与纯化73

第一节 核酸分离与纯化的设计与原则73

一、材料与方法的选择73

二、技术路线的设计74

三、鉴定与保存75

第二节 基因组 DNA 的分离与纯化77

一、分离与纯化的方法77

二、DNA 片段的回收80

三、基因组 DNA 分离纯化的方法学评价与质量保证81

第三节 质粒 DNA 的提取与纯化82

一、提取与纯化方法82

二、质粒 DNA 的回收84

三、质粒 DNA 提取纯化的方法学评价与质量保证84

第四节 RNA 的分离与纯化85

一、RNA 制备的条件与环境85

二、总 RNA 的分离与纯化86

三、mRNA 的分离与纯化87

第七章 DNA 重组技术89

第一节 工具酶89

一、限制性内切酶89

二、DNA 聚合酶91

三、DNA 连接酶92

四、T4多核苷酸激酶92

五、碱性磷酸酶93

第二节 DNA 重组载体93

一、质粒载体93

二、噬菌体载体95

三、真核细胞的克隆载体98

四、人工染色体99

第三节 DNA 重组与鉴定100

一、DNA 重组100

二、重组子的筛选与鉴定105

第四节 外源基因的蛋白表达107

一、原核表达体系107

二、真核表达体系110

三、表达产物的分离、纯化与鉴定113

第五节 DNA 序列测定115

一、双脱氧末端终止法测序115

二、Maxam-Gilbert 化学降解法测序118

三、DNA 序列分析的自动化122

四、测序策略123

第八章 聚合酶链式反应及其在基因诊断中的应用125

第一节 聚合酶链式反应125

一、PCR 的原理和反应过程125

二、PCR 的反应体系和反应条件125

三、PCR 技术的质量控制128

第二节 以 PCR 为基础的相关技术129

一、逆转录 PCR129

二、定量 PCR131

三、多重 PCR131

四、免疫 PCR131

五、差异显示 PCR133

六、PCR 诱导定点突变133

七、原位 PCR134

第三节 PCR 产物的检测135

一、PCR-限制性片段长度多态性135

二、等位基因特异性寡核苷酸135

三、单链构象多态性136

四、变性梯度凝胶电泳136

五、融点曲线分析137

六、PCR 产物的序列分析137

第四节 PCR 技术在分子诊断中的应用137

一、标本制备137

二、PCR 在病原体基因检测中的应用138

三、PCR 技术在单基因病致病基因检测中的应用143

四、PCR 技术在疾病相关基因检测中的应用151

五、PCR 技术在移植配型和法医学鉴定中的应用153

第九章 核酸分子杂交技术与应用156

第一节 核酸分子杂交的基本原理与分类156

一、核酸分子杂交的基本原理156

二、核酸分子杂交分类157

第二节 杂交反应的影响因素160

一、长探针杂交160

二、短小募核苷酸探针的杂交164

第三节 探针的设计165

一、核酸探针的种类166

二、核酸探针标记方法的选择167

三、探针的长度168

第四节 核酸分子与固相介质的结合168

一、支持介质的类型和性质168

二、核酸分子的转移169

三、核酸的固定170

第五节 探针的标记171

一、全程标记171

二、末端标记173

第六节 杂交与杂交后检测174

一、杂交174

二、杂交信号的检测176

三、滤膜和探针的重复使用179

第七节 核酸分子杂交方法学评价与应用179

一、点/狭缝杂交方法学评价与应用179

二、Southern 杂交方法学评价与应用180

三、Northern 杂交方法学评价与应用180

四、原位杂交方法学评价与应用180

第十章 蛋白质分析技术182

第一节 蛋白质的分离纯化182

一、材料的选择182

二、细胞破碎的方法183

三、蛋白质混合物的分离方法184

四、蛋白质分离纯化的条件188

第二节 Western 印迹技术190

一、蛋白质样品的制备190

二、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳191

三、蛋白质的电转移191

四、靶蛋白的免疫学检测192

第十一章 生物芯片技术与应用193

第一节 DNA 芯片技术193

一、在片化学合成法探针的设计、合成与芯片制作193

二、微阵列法探针的制备与芯片制作197

二、待测样品的准备198

四、杂交与结果分析198

五、DNA 芯片技术的应用199

第二节 蛋白质芯片与缩微芯片技术200

一、蛋白质芯片技术200

二、缩微芯片技术200

第十二章 细胞凋亡与检测技术201

第一节 细胞凋亡的生物学意义及其相关基因201

一、细胞凋亡的概念与生物学意义201

二、细胞凋亡的相关基因201

第二节 细胞凋亡信号的传递202

一、经典的信号传递途径202

二、死亡受体介导的信号传递204

第三节 细胞凋亡与人类疾病204

一、肿瘤与细胞凋亡204

二、系统性红斑狼疮与细胞凋亡205

三、肾脏疾病与细胞凋亡205

四、Alzheimer 疾病与细胞凋亡206

第四节 细胞凋亡的形态学与生物化学特征206

一、细胞凋亡的形态学特征206

二、细胞凋亡的生物化学特征207

第五节 细胞凋亡的检测技术207

一、细胞凋亡的形态学检测技术208

二、细胞凋亡的生物化学检测技术209

三、细胞凋亡的分子生物学检测技术210

四、细胞凋亡的免疫学检测技术212

参考文献214

汉英对照索引216