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第一章　绪论1

第一节　实验教学的目的和要求1

第二节　实验报告的撰写2

第三节　实验室守则3

第二章　医学生物学实验基本技术及原理5

第一节　生物化学与分子生物学实验常用仪器与基本操作5

一、常用仪器设备5

二、基本操作5

三、实验样品的制备8

第二节　生物化学常用实验方法及基本原理9

一、分光光度法9

二、层析法10

三、电泳法13

四、离心分离技术13

第三节　分子生物学常用实验方法及基本原理14

一、PCR技术14

二、印迹技术16

三、核酸分子杂交技术17

四、重组DNA技术18

第四节　细胞生物学与遗传学实验常用仪器和基本操作21

一、显微镜的结构和使用21

二、细胞培养必需设备和无菌操作技术24

第五节　细胞生物学常用实验方法及基本原理25

一、细胞形态结构的观察方法25

二、细胞组分的分析方法27

三、流式细胞分析技术27

四、细胞培养技术27

第六节　医学遗传学常用实验方法及基本原理28

一、染色体的制备与分析技术28

二、人类遗传病的分子生物学诊断方法29

第三章 细胞和亚细胞组分分析实验方法31

第一节　细胞培养的基本方法31

一、细胞的原代培养31

实验1　鸡胚成纤维细胞的原代细胞培养33

实验2　大鼠骨髓基质细胞的体外培养35

二、细胞的传代培养36

实验1 贴壁细胞的传代培养37

实验2 悬浮细胞的传代培养38

三、培养细胞的生长测定39

实验1　体外培养细胞的计数与死、活细胞鉴别39

实验2　MTT比色法41

实验3　化学物质对细胞的作用41

第二节　细胞和亚细胞组分分析的生物学实验方法42

一、细胞形态和细胞分裂的观察42

实验1　细胞标本的制备与形态观察42

实验2　细胞无丝分裂和有丝分裂44

二、亚细胞组分的分离及观察鉴定方法45

实验　亚细胞组分的分离及观察鉴定45

第四章　生物分子分析实验方法49

第一节　生物分子在细胞内定位与分布的分析方法49

一、核酸在细胞内的分布49

实验　DNA特异显示法定性分析核酸在细胞内的分布49

二、酶和蛋白质在细胞内的定位52

实验1 乳酸脱氢酶在细胞内定位的分析52

实验2　碱性和酸性蛋白质在细胞内定位的分析54

三、糖和脂类在细胞内的分布55

实验1　过碘酸希夫反应定性分析糖原在细胞内的分布55

实验2 苏丹黑染色法定性分析脂类在细胞内的分布56

第二节　蛋白质的分析实验方法57

一、蛋白质性质的分析57

实验1　蛋白质的两性解离性和等电点测定57

实验2　蛋白质的变性和沉淀反应58

二、蛋白质含量的测定61

实验1　蛋白质含量的Folin-酚法测定61

实验2 紫外光吸收法测定蛋白质浓度63

三、蛋白质和氨基酸的分离、提取、纯化和鉴定65

实验1 离子交换柱层析法分离混合氨基酸65

实验2　醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质66

实验3　血清γ-球蛋白的初步分离提取68

实验4　血清γ-球蛋白的精细分离与纯度鉴定69

第三节　酶的分析实验方法75

一、酶反应条件的选择75

实验　酶促反应的影响因素75

二、酶促反应动力学研究77

实验　碱性磷酸酶的Km值测定77

三、酶的分离提取及活性测定81

实验　碱性磷酸酶的分离提取和比活性测定81

第四节　糖类和脂类分析实验方法84

一、糖类分离、提取和鉴定84

实验　茯苓多糖和猪苓多糖的水解与鉴定84

二、脂类分离、提取和鉴定85

实验　脂质的薄层层析85

第五章　分子生物学实验方法87

第一节　DNA的制备与分析方法87

一、DNA的制备87

实验1 组织DNA的分离、提取和纯化87

实验2　血细胞DNA的快速分离提取88

二、DNA的分析90

实验1 琼脂糖凝胶电泳法分离DNA片段90

实验2　核酸分子探针标记与杂交实验92

第二节　基因表达分析方法97

一、RNA的制备97

实验　动物组织总RNA的提取和纯化97

二、基因表达的分析方法99

实验1 RT-PCR法检测基因的表达99

实验2　蛋白质印迹法101

第三节　基因工程技术103

一、载体DNA的制备与鉴定103

实验　质粒DNA的快速分离提取和酶切与鉴定103

二、体外DNA扩增技术107

实验　聚合酶链式反应扩增基因组DNA107

三、目的基因的分离与鉴定109

实验　小鼠肝脏细胞β-actin基因片段的分离提取、扩增与鉴定109

四、重组DNA分子的构建、导入和筛选114

实验1 目的基因的纯化与回收和重组DNA的构建114

实验2　重组DNA的导入和筛选117

第六章　生物学实验技术在医学研究中的应用120

第一节　临床疾病与生物化学特定物质的测定120

一、高脂血症与血清脂类分析测定120

实验　血清甘油三酯、总胆固醇和HDL-胆固醇的测定120

二、糖尿病与血糖浓度分析测定125

实验　血糖浓度的定量测定126

三、肝脏疾病与血清酶活性的分析测定129

实验　血清谷-丙转氨酶活性测定129

四、肾功能异常与血清尿素氮的分析测定131

实验　血清尿素氮含量的测定131

第二节　人类遗传疾病与染色体核型和系谱分析132

一、染色体的制备与观察132

实验1 小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察132

实验2　人体外周淋巴细胞培养及染色体标本的制备134

实验3　人类染色体显带技术136

二、染色体的核型分析138

实验　正常人染色体核型分析及人类异常染色体的识别138

三、系谱的绘制和分析143

实验 系谱分析143

四、人类遗传病的分型及特点146

实验　人类遗传病的分型及特点146

第三节　生物学实验技术在肿瘤研究中的应用146

一、肿瘤细胞的集落培养与细胞中物质的测定147

实验　肿瘤细胞集落形成率和细胞中总蛋白质含量的测定147

二、分子生物学实验技术在癌症研究中的应用150

实验　PCR—SSCP技术在癌基因筛查中的应用150

参考文献152

附录153