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第1章 肝炎的实验诊断概述1

一、概述1

（一）病毒性肝炎1

（二）自身免疫性肝病1

（三）酒精性肝炎和非酒精性脂肪肝3

（四）药物性肝炎6

（五）细菌感染引起的肝病6

（六）其他病毒引起的肝炎7

（七）寄生虫感染引起的肝脏病变7

（八）遗传代谢性肝病8

二、病毒性肝炎新病原体的探索8

（一）GB病毒感染8

（二）TTV感染9

（三）SEN病毒感染10

三、病毒性肝炎实验诊断存在的问题和展望10

（一）存在的问题10

（二）展望12

第2章 肝炎病毒及其标志物检验的诊断用品和质量控制15

一、概述15

二、甲型肝炎病毒及其标志物检验的诊断用品和质量控制16

（一）甲型肝炎病毒RNA检测16

（二）甲型肝炎病毒抗原检测16

（三）抗-HAVIgM检测16

（四）抗-HAV总抗体测定17

（五）国家对甲型肝炎病毒诊断试剂的管理及参考品17

（一）乙型肝炎诊断试剂简介18

（二）各种乙型肝炎诊断试剂及其方法18

三、乙型肝炎病毒及其标志物检验的诊断用品和质量控制18

（三）国家质控参考品和标准19

（四）乙型肝炎诊断试剂质量检定情况20

四、丙型肝炎病毒及其标志物检验的诊断用品和质量控制21

（一）简介21

（二）HCV抗体的检测21

（三）HCV基因及抗原的检测22

（四）国内丙型肝炎诊断试剂的现状及质量控制22

五、丁型肝炎病毒及其标志物检验的诊断用品25

（一）丁型肝炎病毒及其标志物检验25

（二）HDAg的检测25

六、戊型及庚型肝炎病毒标志物检验的诊断用品26

（一）戊型肝炎病毒标志物的诊断用品26

（四）HDVRNA的检测26

（三）抗-HD的检测26

（二）庚型肝炎病毒标志物诊断用品的初步研究27

七、肝炎实验诊断生物芯片产品和质量控制要点27

（一）制造的基本要求28

（二）专用原材料28

（三）专用仪器28

（四）制备程序29

（五）半成品检定29

（六）成品检定29

第3章 肝炎病毒检测实验室的质量管理30

一、适用范围30

二、依据和目的30

三、定义30

四、建立质量管理体系31

（一）标本的来源37

一、概述37

第4章 病毒性肝炎检验标本的收集、运送和保存以及标本检测中的注意事项37

（二）常见标本的收集、运送和保存38

二、病毒性肝炎标本收集、运送和保存的一般原则40

（一）HAV标本的收集、运送和保存40

（二）HBV和HDV标本的加工及其职业安全准则41

（三）HCV标本的收集41

（四）HEV标本的收集和运送42

（五）标本检测中的注意事项42

第5章 肝炎病毒免疫学的检测方法44

一、概述44

（一）肝炎病毒及其免疫学的检测项目44

（二）肝炎病毒免疫学检测的基本原理45

二、甲型肝炎病毒抗体的检测46

（一）抗-HAVIgM检测46

（二）抗-HAV总抗体测定47

三、乙型肝炎病毒抗原和抗体的检测48

（一）HBsAg检测48

（二）抗-HBs检测55

（三）HBeAg检测58

（四）抗-HBe检测61

（五）抗-HBc检测63

（六）pre-s1抗原检测67

（七）pre-s2抗原检测69

（八）抗-pre-s2检测70

四、丙型肝炎病毒抗体的检测71

（一）丙型肝炎病毒抗体酶联免疫法72

（二）丙型肝炎病毒抗体免疫印迹法76

（三）丙型肝炎病毒抗体蛋白芯片检测试剂78

（一）丁型肝炎病毒抗原（HDVAg）的检测80

五、丁型肝炎病毒抗原和抗体的检测80

（二）抗-HDVIgM的检测81

（三）丁型肝炎抗体抗-HDV的检测83

六、戊型肝炎病毒抗体的检测84

（一）酶联免疫法检测抗-HEVIgG抗体84

（二）EIA检测血清中抗-HEVIgM抗体87

七、肝炎病毒免疫复合物的检测88

（一）HBVCIC的检测89

（二）单特异性CIC的检测92

（三）双特异性CIC的检测93

（四）丙型肝炎循环免疫复合物的检测96

第6章 肝炎病毒的基因诊断技术100

一、概述100

（一）基因诊断的方法100

（二）PCR的抗污染问题102

二、抗原捕捉聚合酶链反应检测甲型肝炎病毒RNA103

三、乙型肝炎病毒的基因诊断技术106

（一）荧光定量PCR检测HBVDNA106

（二）定量酶联杂交PCR检测HBVDNA110

（三）使用PCR和微流芯片技术定量HBVDNA及HBV变异株（1896C及YMDD）113

（四）免疫杂交梳PCR检测HBVDNA117

（五）UniArray技术检测HBV拉米夫定耐药突变120

（六）PCR双探针杂交用于HBVDNA定量及基因分型检测123

四、丙型肝炎病毒的基因诊断技术127

（一）免疫杂交PCR检测HCVRNA127

（二）实时荧光PCR定量检测HCVRNA130

（三）通用信号模板扩增核酸技术检测HCVRNA133

（四）NASBA用于HCVRNA的定量检测136

（五）基因芯片法联合检测HBVDNA-HCVRNA139

五、丁型肝炎病毒的基因诊断技术142

（一）逆转录-聚合酶链反应测定HDVRNA142

（二）原位杂交检测肝组织中的HDVRNA144

六、戊型肝炎病毒的基因诊断技术146

第7章 各型病毒性肝炎的血清学反应图解及其标志物的临床意义150

一、概述150

二、甲型肝炎的血清学反应图解及其标志物的临床意义151

三、乙型肝炎血清学反应图解及其标志物的临床意义152

四、丙型肝炎血清学反应图解及其标志物的临床意义159

五、丁型肝炎血清学反应图解及其标志物的临床意义161

六、戊型肝炎血清学反应图解及其标志物的临床意义163

七、肝炎病毒血清学标志物164

（一）乙型肝炎病毒变异的临床意义166

一、肝炎病毒变异的临床意义166

第8章 肝炎病毒的变异性及其检测方法166

（二）丙型肝炎病毒变异的临床意义173

二、肝炎病毒变异的检测方法175

（一）核酸序列分析175

（二）限制性片段长度多态性176

（三）聚合酶链反应　单链构象多态性分析178

（四）异源双链电泳178

（五）5端酶解法179

第9章 病毒性肝炎病理学检查180

一、一般病理学检查180

（一）病毒性肝炎的病理变化180

（二）肝脏组织取材与保存181

（三）肝脏组织的固定181

（五）肝脏组织病理切片及染色技术184

（四）肝脏组织的速冻保存184

二、免疫病理学检查189

（一）免疫荧光组织化学方法189

（二）免疫酶组织化学方法190

（三）免疫金-银染色法193

（四）亲和免疫组织化学方法194

（五）抗原抗体效价的测定195

（六）对照设置196

（七）微波在免疫组织化学中的应用196

三、分子病理学检查197

（一）Southernblot197

（二）免疫转印技术201

（三）原位杂交207

（四）PCR和原位PCR209

（五）细胞凋亡研究技术213

第10章 酒精性肝病和非酒精性脂肪肝的实验诊断219

一、概述219

二、天门冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶测定220

（一）天门冬氨酸转氨酶测定——连续监测法220

（二）丙氨酸转氨酶测定——连续监测法221

三、谷氨酸脱氢酶测定222

四、胆红素的测定、红细胞平均容量224

（一）胆红素的测定224

（二）红细胞平均容量226

五、尿酸的测定——过氧化物酶偶联法226

六、血脂测定228

（一）胆固醇氧化物酶测定法228

（二）甘油三酯磷酸甘油氧化酶测定法228

（三）高密度脂蛋白胆固醇测定——抗体阻碍法229

（四）低密度脂蛋白胆固醇测定230

（六）载脂蛋白测定231

（五）脂蛋白（α）测定——免疫比浊法231

（七）载脂蛋白AI测定232

七、血浆总蛋白及白蛋白测定233

（一）血浆总蛋白测定（双缩脲法）233

（二）血浆白蛋白测定（溴钾酚绿法）233

八、血清相关酶测定233

（一）γ-谷氨酰转移酶测定——连续监测法233

（二）谷胱甘肽转移酶测定——连续监测法234

（三）胆碱酯酶测定——连续监测法235

（四）天门冬氨酸氨基转移酶同工酶235

（五）碱性磷酸酶测定——连续监测法236

（六）鸟氨酸氨基甲酰转移酶237

九、血清转铁蛋白测定——免疫散射比浊法238

（二）非酒精性脂肪肝239

十、组织病理学变化239

（一）酒精性肝病239

第11章 肝纤维化的实验诊断241

一、肝脏细胞的分离培养241

二、其他肝脏细胞的分离方法243

三、肝组织羟脯氨酸测定243

四、肝脏细胞外基质成分的检验244

（一）Ⅲ型前胶原氨基端肽244

（二）层连蛋白246

（三）Ⅳ型胶原248

（四）金属蛋白酶组织抑制因子250

（五）透明质酸252

（六）脯氨酸羟化酶254

（一）抗核抗体的新概念257

第12章 肝内胆汁淤积性疾病和自身免疫性肝炎的实验诊断257

一、抗核抗体的临床意义及检测方法257

（二）抗核抗体检测的临床意义258

（三）抗核抗体的检测方法258

（四）抗核抗体检测的实验操作259

二、抗脱氧核糖核酸抗体的临床意义及检测方法260

（一）抗-DNA抗体概述260

（二）抗-DNA抗体临床意义260

（三）抗-dsDNA抗体的检测方法261

（四）抗-dsDNA检测实验操作（马疫锥虫间接免疫荧光法）261

三、自身免疫性肝病相关自身抗体临床意义及检测方法262

（一）自身免疫性肝炎262

（二）原发性胆汁肝硬化263

（三）类风湿因子的临床意义及检测方法264

（四）抗线粒体抗体（AMA）——M2亚型的测定265

（五）原发性胆汁性肝硬化的病理学改变266

四、抗肝／肾细胞微粒体抗体Ⅰ型测定270

（一）免疫荧光法检测抗-LKM1270

（二）固相放射免疫法检测抗-LKM1270

五、抗-GOR抗体的检测271

六、固相放射免疫检测可溶性肝细胞抗原272

七、免疫荧光法检测抗肝细胞膜抗原抗体272

八、抗甲状腺球蛋白抗体的检测（抗-TG）273

（一）IFT检测抗-TG抗体273

（二）PHA法检测抗-TG抗体273

（三）ELISA检测抗-TG抗体274

九、抗甲状腺微粒体抗体的检测274

（一）单向免疫扩散试验275

十、抗骨骼肌肌动蛋白抗体的检测275

十一、血清IgG、IgA、IgM的检测275

（二）免疫比浊试验276

（三）免疫胶乳浊度测定法276

（四）其它血清学方法277

（五）免疫球蛋白正常参考值277

十二、IgD与IgE的检测277

（一）免疫扩散放射自显影试验277

（二）放射免疫分析技术278

（三）酶联免疫吸附试验278

（四）正常参考值及临床意义279

［附］血清补体含量测定279

（一）溶血法测定279

（二）免疫血清学方法测定282

一、引起肝损伤的常见药物种类284

第13章 药物性肝炎284

二、药物性肝损伤的发病机制289

三、药物性肝损伤的诊断291

四、药物性肝炎的临床分类294

五、诊断和鉴别诊断295

六、诊断实例296

（一）血清中扑热息痛的含量测定296

（二）尿中异烟肼及乙酰异烟肼的比色测定297

第14章 细菌感染与肝胆疾病的实验诊断299

一、概述299

二、伤寒、副伤寒、沙门菌、大肠埃希菌和志贺菌的检查301

三、葡萄球菌、链球菌（肺炎链球菌）的检查306

四、淋病奈瑟菌的检查311

五、钩端螺旋体、梅毒螺旋体的检查312

六、产气荚膜杆菌检查315

七、结核杆菌检查317

八、布氏杆菌检查319

九、Q热检查321

第15章 引起人类肝炎的其他病毒的实验诊断323

一、概述323

（一）疱疹病毒科与肝炎324

（二）腺病毒科——腺病毒与肝炎326

（三）微小病毒科——人类微小病毒B19与肝炎326

（四）披膜病毒科——风疹病毒与肝炎326

（五）副黏病毒科与肝炎327

二、巨细胞病毒检查327

（一）人类巨细胞病毒的分离和鉴定327

（二）免疫荧光技术检测抗-HCMVIgM329

（三）酶联免疫吸附试验检测抗-HCMVIgM331

（四）聚合酶链反应检测HCMVDNA332

三、EBV检查335

（一）免疫荧光法检测EBVIgA抗体335

（二）聚合酶链反应检测EBVDNA336

（三）酶联免疫吸附试验检测抗-EBVIgM抗体338

四、风疹病毒检查339

（一）风疹病毒的分离和鉴定339

（二）ELISA检测风疹病毒IgM抗体341

（三）RT-PCR检测RVRNA342

五、单纯疱疹病毒检查345

（一）ELISA检测血清的HSV-IgM345

（二）单纯疱疹病毒的分离鉴定346

（三）聚合酶链反应检测HSVDNA347

六、肠道病毒检查350

（一）免疫电镜技术检测肠道病毒（EV）350

（二）肠道病毒的分离与鉴定351

（三）逆转录聚合酶链反应检测肠道病毒RNA352

七、HIV检查354

（一）酶联免疫法检测HIVP24抗原354

（二）酶联免疫法检测抗-HIV抗体355

（三）HIV确证检测356

第16章 寄生虫感染与肝胆疾患的实验诊断358

一、血吸虫检查358

（一）概述358

（二）实验诊断359

二、疟原虫检查360

（一）概述360

（二）实验诊断360

三、阿米巴检查361

（一）概述361

（二）实验诊断362

四、华支睾吸虫检查363

（一）概述363

（二）实验诊断363

五、细粒棘球绦虫检查363

（一）概述363

（二）实验诊断364

（一）概述364

七、寄生虫的实验诊断技术364

六、肝片吸虫检查364

（二）实验诊断364

（一）粪便检查365

（二）血液涂片检查369

（三）十二指肠引流液检查371

（四）免疫学检查372

第17章 细胞免疫功能的测定377

一、概述377

二、T淋巴细胞亚群检测378

（一）免疫荧光法379

（二）免疫酶法——碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶桥联酶染色法380

（三）SPA花环法381

（四）流式细胞仪自动细胞计数法383

（一）51Cr释放法384

三、NK细胞活性测定384

（二）乳酸脱氢酶释放法385

四、细胞毒试验386

（一）特异性细胞毒性T细胞活性测定——HBV特异性细胞毒性T细胞试验386

（二）抗体依赖细胞介导的细胞毒试验——51Cr释放法388

（三）淋巴因子激活的杀伤细胞活性测定390

（四）白细胞移动抑制试验391

五、白细胞黏附抑制试验394

（一）血细胞计数板法394

（二）电子血细胞计数器法395

六、测定细胞免疫功能的皮肤试验396

第18章 细胞因子的检验399

一、概述399

（一）细胞因子的种类399

（二）细胞因子的生物学效应与应用价值399

（三）细胞因子与肝纤维化的病理作用399

（五）细胞因子的检测法400

（四）肝内CK的产生细胞400

二、人体干扰素的检验402

（一）人γ干扰素的测定402

（二）干扰素α、β、γ诱导的抗病毒活性的检测404

三、肿瘤坏死因子的检验405

四、白细胞介素的检验407

（一）白细胞介素2407

（二）白细胞介素4409

（三）白细胞介素6410

五、生长因子的检验410

（一）基本概念414

（二）临床生化检验室内质量控制的基本原理与方法414

一、临床生化检验质量控制的基本原理和方法414

第19章 血清生化指标测定414

（三）临床生化检验室间质评的基本原理与方法416

二、蛋白质及蛋白质电泳测定419

（一）血清总蛋白双缩脲测定法419

（二）血清总蛋白溴甲酚绿测定法420

（三）血浆纤维蛋白原比浊测定法422

（四）血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳423

三、脂类及脂蛋白测定426

（一）甘油三酯磷酸甘油氧化酶测定法426

（二）胆固醇氧化酶测定法428

（三）HDL-C磷钨酸-镁沉淀测定法429

（四）脂蛋白电泳430

（五）血清ApoAI和ApoB免疫透射比浊测定法432

四、胆色素测定433

（一）血清总胆红素和结合胆红素测定——改良J-G测定法433

（二）尿胆红素、尿胆原的测定435

（一）凝血因子测定437

五、凝血障碍测定437

（二）DIC实验室诊断概述440

六、糖耐量试验443

（一）葡萄糖耐量试验443

（二）半乳糖耐量试验445

第20章 血清酶活性的测定447

一、血清酶测定的基本原理447

（一）血清酶的分类447

（二）血清酶变化的病理生理机制448

（三）血清酶的生理变化449

（四）测定方法、标本处理等对测定结果的影响450

二、肝脏疾病的酶学诊断452

（二）肝细胞的不均一性454

（一）肝组织结构和血清酶活性变化454

（三）肝血窦的解剖特点455

三、血清酶活性的测定455

（一）肝细胞损伤有关的血清酶测定455

（二）肝胆系统梗阻有关的血清酶活性测定472

（三）肝纤维化有关的血清酶活性测定477

四、血清酶活性测定的校准480

（一）校准方法与公式481

（二）校准值误差分析482

第21章 肝脏排泄功能试验484

一、吲哚青绿试验484

二、酶法测定血清总胆汁酸487

三、药物代谢试验490

（一）安替匹林血浆清除试验490

（二）静脉色氨酸耐量试验491

四、碱性磷酸酶试验493

五、亮氨酸氨基肽酶试验494

第22章 遗传代谢性肝病的实验室诊断499

一、概述499

二、血浆和血清铜的测定500

（一）比色法500

（二）原子吸收分光光度法501

三、尿液中铜的测定——原子吸收分光光度法502

四、肝组织中铜的测定503

五、铜蓝蛋白氧化酶的测定503

六、血清铁的测定505

（一）亚铁嗪法505

（二）酶法506

（一）放射免疫法507

七、血清铁蛋白的测定507

（二）酶联免疫吸附试验（ELISA）508

八、转铁蛋白饱和度的测定509

第23章 生物芯片简介及其在肝病诊断中的应用512

一、生物芯片的概念和特点512

二、生物芯片的分类513

三、生物芯片的制备和检测514

（一）芯片载体的表面修饰514

（二）芯片阵列制作方式514

（三）杂交探针的种类与制备515

（四）样品制备和标记517

（五）分子杂交和杂交微环境518

（六）杂交信号采集和处理518

（七）生物信息的分析和提取519

（二）基因突变分析521

四、生物芯片在医学中的应用521

（一）微缩实验室芯片521

（三）克隆选择及文库筛选522

（四）测序芯片522

（五）基因多态性分析522

（六）基因表达谱分析522

（七）微生物菌种鉴定、致病机制及抗药性分析523

（八）药物筛选芯片523

五、生物芯片在肝病诊断中的应用523

（一）肝炎病毒联合检测芯片523

（二）肝炎病毒基因分型芯片524

（三）肝炎病毒血清学分型及标志物检测蛋白质（或肽）芯片524

（四）耐药基因突变检测芯片524

（五）其它524

一、如何利用常见的搜索引擎去获取肝炎的相关信息526

第24章 网络技术在肝炎研究信息收集方面的应用526

二、与肝炎直接相关的专业性网站和其网址528

（一）与肝炎直接相关的学会、协会和组织528

（二）与肝炎相关的研究所和实验中心530

（三）与肝炎相关的专业杂志531

（四）医学用的专业检索网站531

（五）与肝炎相关的一些重要的信息收集网站532

（六）相关的软件信息网站536

（七）相关的分子生物学信息网站537

（八）部分国家的肝炎相关网站537

附录1　HBV、HCV感染的残余危险和HBV、HCV核酸扩增试验标准品的国际标准542

附录2　部分供应商545

附录3　本书有关的略语547