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第一章 绪论1

一、基因工程的概念1

二、基因工程发展史2

三、基因工程的巨大意义3

四、生物技术与基因工程4

五、我国的基因工程9

六、基因工程的安全性问题10

七、我国的《基因工程安全管理办法》12

第二章 基因工程的流程15

一、基因工程的基本步骤15

二、基因工程的上游工程——基因克隆15

三、基因工程的流程16

四、基因工程下游工程的分化16

五、原核细胞表达系统18

六、植物基因工程19

七、昆虫或动物细胞表达系统21

八、动物基因工程22

九、基因治疗23

第三章 DNA的分子特性与利用25

一、脱氧核糖核酸25

二、DNA变性26

三、复性与杂交27

四、DNA的复制28

五、DNA的修复29

六、生物的基因重组29

七、基因30

八、基因表达及其调控31

九、启动子和增强子33

十、DNA的分离和提取34

十一、基因突变39

十二、转座子及其在基因工程中的应用42

第四章 各种工具酶45

一、工具酶与基因工程45

二、限制酶46

三、DNA聚合酶51

四、DNA连接酶54

五、S1核酸酶55

六、Bal31核酸酶55

七、碱性磷酸酶56

八、逆转录酶56

第五章 目的基因的制取58

一、目的基因58

二、鸟枪法60

三、物理化学法61

1．物理化学法分离基因的基本原理61

2．物理化学法分离基因的主要方法61

四、化学合成基因62

五、酶促逆转录合成法63

六、聚合酶链式反应63

七、基因文库的概念68

八、基因文库的大小68

九、基因组文库70

十、cDNA文库72

第六章 基因载体的选择与构建75

一、基因克隆与基因重组75

二、基因载体75

三、载体的报告基因（标记基因）76

四、细菌质粒载体79

1．质粒的概念79

2．质粒DNA的分子特性79

3．质粒的复制和遗传80

4．质粒的报告基因81

5．质粒的转座子82

6．质粒的改造82

7．质粒载体的条件82

8．质粒载体的多克隆位点83

9．辨色鉴别重组克隆的质粒载体84

10．常用的质粒载体84

11．质粒DNA的提取85

五、噬菌体载体87

1．噬菌体和噬菌体载体的特点87

2．λ噬菌体88

3．溶菌性反应与溶源性反应90

4．λ噬菌体的包装91

5．野生型λ噬菌体的改造92

6．单链噬菌体载体95

7．粘性质粒载体96

六、动物病毒载体97

1．动物病毒载体的特点97

2．杆状病毒载体98

3．SV40载体100

4．痘苗病毒载体103

5．逆转录病毒载体104

6．其他动物病毒载体107

七、酵母质粒载体107

1．酵母质粒载体的特点107

2．整合载体108

3．自我复制载体108

4．酿酒酵母载体系统109

第七章 基因与载体连接（重组与克隆）112

一、基因重组的概念112

二、亚克隆113

三、基因重组对载体的要求114

四、连接前的处理116

五、粘性末端连接118

六、平端连接121

七、人工接头连接122

八、同聚物加尾连接124

九、人生长激素基因的克隆126

第八章 重组DNA导入受体细胞132

一、克隆与导入方法132

二、受体细胞133

三、大肠杆菌宿主菌133

四、受体细菌的感受态134

五、转化反应135

六、磷酸钙沉淀法137

七、体外包装转染法138

八、共转化139

九、电转化141

十、微弹技术142

十一、微注射技术143

十二、脂质体导入法144

十三、转化酵母菌146

第九章 重组体的筛选148

一、转化子与筛选的概念148

二、筛选方法的类型148

1．快速细胞破碎法149

2．煮沸法150

3．基因定位法150

4．DNA序列测定156

5．依赖具有筛选性的载体161

6．MRNA翻译检测163

7．核酸探针与菌落原位杂交163

8．Southern印迹杂交试验167

9．免疫化学方法167

10．酶免疫检测分析172

第十章 目的基因的表达174

一、基因工程的目的174

二、制约目的基因表达的因素174

三、阅读框架175

四、启动子与转录的影响175

五、翻译过程对表达的影响177

六、表达体系与表达产物的形式179

七、大肠杆菌表达体系180

八、人生长素基因在大肠杆菌中表达181

九、构建分泌型表达载体186

十、真核细胞表达体系的特点187

十一、酵母表达体系188

十二、昆虫或昆虫细胞表达体系190

十三、哺乳动物细胞表达体系192

十四、新型的胞浆表达体系193

十五、表达检测系统194

第十一章 克隆的策略199

一、克隆方法的分类199

二、用质粒载体进行克隆202

三、用λ噬菌体进行克隆204

四、用粘粒载体进行克隆204

五、Northern杂交法205

六、cDNA文库筛选法克隆206

七、杂交筛选法207

八、磁珠捕捉法208

九、产物导向法210

十、岛屿获救PCR法211

十一、Notl连锁片段筛选法213

十二、外显子捕捉法与外显子扩增法214

十三、动物园杂交法（zoo blot）216

十四、剪接位点筛选法216

十五、作图克隆法217

十六、利用杂种细胞克隆法220

十七、消减杂交法221

十八、相同序列克隆法223

十九、差异显示法224

二十、显微切割与微克隆法226

二十一、互补克隆法227

二十二、插入诱变法228

二十三、其他克隆方法230

第十二章 克隆DNA的定向诱变232

一、基因突变与人工诱变技术232

二、缺失突变和插入突变234

三、碱基置换236

四、寡核苷酸的定向诱变239

五、定向诱变与蛋白质工程242

第十三章 基因打靶、遗传标记与检测243

一、基因打靶技术243

二、限制性片段长度多态性247

三、随机扩增多态DNA技术248

四、单链DNA构象多态性技术249

五、扩增阻滞突变系统250

六、表面呈现技术253

七、原位DNA合成技术256

八、连接酶链反应257

九、双标记寡核苷酸捕获分析法260

第十四章 反义技术与ribozyme的应用261

一、反义寡核苷酸261

二、反义技术的原理262

三、ASON的改造与反义药物263

四、核酶（ribozyme）263

1．ribozyme的克隆和应用价值264

2．用于兽医和畜禽抗病育种266

3．用于植物基因工程267

4．用于基因治疗268

主要参考文献271

索引274