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第一章 核酸的结构及性质1

本章大纲1

一、核酸1

二、核糖及碱基2

三、核苷2

四、核苷酸3

五、DNA与RNA的结构4

六、DNA与RNA的物理性质6

本章总结8

试题范例8

参考文献10

第二章 复制、转录及翻译11

本章大纲11

一、简介11

二、DNA复制11

三、转录12

四、pre-mRNA的加帽13

五、pre-mRNA的剪接14

六、pre-mRNA 3'端的改造17

七、翻译18

八、翻译的调控20

九、核糖体22

十、原核细胞的翻译23

十一、真核细胞的翻译起始25

十二、内部核糖体进入位点27

本章总结27

试题范例29

参考文献30

第三章 DNA与RNA的分离与纯化33

本章大纲33

一、质粒DNA的分离33

二、染色体DNA的分离36

三、DNA的定性及定量36

四、RNA的分离37

五、poly-A＋ mRNA的萃取38

本章总结38

试题范例39

参考文献40

第四章 酶41

本章大纲41

一、酶的种类41

二、限制性内切酶的发现42

三、限制性内切酶的分类42

四、限制性内切酶的命名43

五、经限制性内切酶切割后的DNA末端44

六、影响限制性内切酶活性的因素44

七、常用的限制性内切酶45

八、同切酶46

九、甲基化酶48

十、作用于甲基化DNA的限制性内切酶48

十一、其他降解酶49

十二、RNA聚合酶50

十三、DNA聚合酶50

十四、修饰酶51

本章总结52

试题范例53

参考文献55

第五章 启动子及操纵子56

本章大纲56

一、启动子56

二、转录终止子的特性58

三、真核基因的转录59

四、影响转录的要素60

五、操纵子61

六、乳糖操纵子61

七、乳糖操纵子的抑制61

八、乳糖操纵子的活化63

本章总结64

试题范例65

参考文献66

第六章 电泳68

本章大纲68

一、电泳的种类及应用68

二、RNA电泳68

三、电泳胶的分辨率69

四、脉冲电泳法69

五、脉冲电泳所用DNA的制备70

六、影响脉冲电泳的因素70

本章总结70

试题范例71

参考文献72

第七章 基因克隆73

本章大纲73

一、克隆载体的必要条件73

二、pBR322及pUC19载体74

三、DNA片段及载体的制备75

四、DNA的定量与定性76

五、DNA片段与载体的比例76

六、离心透析法77

七、转化作用77

八、转化体的筛选78

九、DNA片段与载体的连接79

十、避免载体自接的方法82

十一、加尾、连接物及连接头的应用82

十二、大肠杆菌的基因型83

本章总结85

试题范例87

参考文献88

第八章 DNA交互配对反应90

本章大纲90

一、DNA交互配对的定义与应用90

二、Southern转移印迹法91

三、探针的标记92

四、RNA探针的制备93

五、非放射性探针94

六、交互配对反应的前处理98

七、交互配对的困难度98

八、Northern转移印迹法99

九、探针的来源99

本章总结100

试题范例102

参考文献103

第九章 基因文库104

本章大纲104

一、基因文库的定义及种类104

二、λ噬菌体的生活史105

三、λ载体的种类106

四、λ噬菌体基因转录的调控机制108

五、λ溶原菌的诱导109

六、决定λ进入溶菌状态或潜伏状态的因素110

七、产生透明噬菌斑的λ变种110

八、λgt10的特性及应用111

九、λgt11的特性及应用111

十、一般性及特定性的转导媒介112

十一、自cDNA文库分离特定的基因112

十二、cDNA的合成113

十三、单一方向cDNA的克隆115

十四、λ噬菌体的组装116

十五、试管内λ噬菌体的组装118

十六、选择性cDNA文库的建立118

十七、cDNA文库内特定基因的筛选118

本章总结119

试题范例120

参考文献121

第十章 限制性内切酶切点定位123

本章大纲123

一、重组载体的检定123

二、限制性内切酶切点定位124

本章总结126

试题范例126

第十一章 DNA定序127

本章大纲127

一、DNA定序的原理127

二、Maxam and Gilbert定序法128

三、Sanger定序法129

四、Sanger定序法新合成DNA的标记131

五、M13噬菌体的特性132

六、M13载体的发展史133

七、噬菌粒的发展史135

八、定序常遇到的问题137

九、循环定序法137

十、自动定序法138

十一、焦磷酸测序138

十二、活体内切出系统140

本章总结141

试题范例142

参考文献143

第十二章 克隆载体145

本章大纲145

一、载体携带DNA片段的限度145

二、EMBL3及EMBL4载体145

三、黏粒载体147

四、酵母菌人工染色体载体148

五、细菌人工染色体载体153

六、P1噬菌体载体154

本章总结155

试题范例157

参考文献157

第十三章 聚合酶链反应159

本章大纲159

一、PCR的发明及其原理159

二、PCR引物的设计160

三、PCR的种类163

四、PCR反应的污染问题166

五、PCR反应的对照组167

六、避免非特异性PCR反应的方法167

七、PCR的应用168

八、PCR产物的克隆170

九、PCR适用的DNA聚合酶172

十、其他的扩增方法172

本章总结177

试题范例180

参考文献181

第十四章 蛋白质的表达182

本章大纲182

一、利用大肠杆菌制造外来蛋白质的优点与难处182

二、可被诱导的启动子182

三、融合蛋白质183

四、重组蛋白质的纯化184

五、附加部分的切除185

六、翻译框架的维持185

七、表达质粒的制作186

八、基因表达的测定188

九、利用噬菌体展示制造抗体189

十、真核基因表达系统193

十一、在哺乳类细胞表达蛋白质的调控198

十二、重组载体送入细胞的方法200

十三、Gateway克隆系统201

本章总结203

试题范例205

参考文献206

第十五章 基因突变、转基因动物和RNA的干扰作用208

本章大纲208

一、基因突变的方法208

二、以限制性内切酶进行基因突变208

三、单个碱基的突变209

四、以PCR方法改变基因210

五、改良的PCR基因突变法213

六、同源重组215

七、利用同源重组插入一段DNA以破坏基因216

八、单端及双端的同源重组217

九、利用同源重组删除一段DNA以破坏基因218

十、利用同源重组进行基因替换219

十一、转基因动物219

十二、RNA的干扰作用221

本章总结222

试题范例224

参考文献224

第十六章 病毒载体226

本章大纲226

一、构成病毒载体的必要条件226

二、逆转录病毒载体227

三、腺病毒载体231

四、腺病毒附属病毒载体233

五、单纯疱疹病毒载体234

本章总结235

试题范例237

参考文献237

第十七章 常用的尖端技术239

本章大纲239

一、核连缀分析239

二、报道基因实验240

三、电泳迁移率转变试验240

四、DNaseⅠ足迹法240

五、染色体免疫沉淀法241

六、双杂交系统242

七、三杂交系统244

八、转录起始点的判定245

九、S1核酸酶分析246

十、核糖核酸酶A保护试验247

十一、单链构象多态性247

十二、异源双链体分析247

十三、变性梯度凝胶电泳247

十四、随机扩增多态DNA或任意引物聚合酶链反应248

十五、增值性断片长度多态现象248

十六、mRNA分化显示250

十七、DNA微阵列250

十八、基因表达系列分析250

十九、大规模平行信号测序系统252

二十、寡核苷酸链接和检测定序256

二十一、全基因表达分析261

二十二、代表性差别筛选法262

本章总结263

试题范例263

参考文献265

各章试题答案267

英中文对照表269